• Увеличить размер шрифта
  • Размер шрифта по умолчанию
  • Уменьшить размер шрифта
Главная Изготовление мицелия Получение посевного мицелия из базидиоспор

Получение посевного мицелия из базидиоспор

E-mail Печать

Для подавления роста бактерий, загрязняющих грибные культуры, проводили выделение на подкисленный сусло-агар (рН 4,5— 5,0), добавляются антибиотики и их комбинации (пенициллин 200 ед., стрептомицин 100 ед. в 1 мл среды). Для выделения культур некоторых медленно растущих видов кусочки плодового тела помещается сначала в стерильные чашки Петри на влажную фильтровальную бумагу и лишь после появления растущего мицелия переносили на агаризованную среду с антибиотиками.

Для некоторых видов кусочки грибов вместе с влажной камерой помещали в холодильник при 4—10 °С на 1—3 суток и только после этого ставили в термостат при 26—28 °С.

Такое охлаждение тканевой культуры особенно эффективно в жаркое время года. Указанным методом легко выделялись культуры вешенок, рядовок, навозников, опенка настоящего, гриба-зонтика, многих афиллофоральных грибов и гастеромицетов. Кусочки плодовых тел грибов, помещенные на питательную среду или во влажную камеру, обычно быстро покрываются растущим мицелием, бактериальное загрязнение незначительно. Кусочки плодовых тел лисички и мокрухи обычно обильно зарастали бактериями. Некоторые грибы, особенно из родов Lactarius и Russula, с трудом выделяются в культуру, несмотря на отсутствие бактериального загрязнения.

В тех случаях, когда размеры, строение или консистенция плодовых тел грибов не позволяли произвести выделение из них мицелиальной культуры, ее  получали из базидиоспор. Базидиоспоры большинства подстилочных сапротрофов, копротрофов, лигнотрофов и других немикоризных грибов прорастают обычно легко. Проращивание же базидиоспор многих микоризообразователей представляет значительные трудности. Проращивание базидиоспор производили или непосредственно после сбора плодовых тел, или же споровая масса хранилась в холодильнике перед посевом. Посев базидиоспор производился в чашки Петри в виде однородной водной суспензии с определенной концентрацией спор (на агаризо-ванную среду), глубинно. Успех прорастания зависит от правильного подбора концентрации спор, которая подбирается для каждого вида и иногда для каждого плодового тела.

Получение посевного мицелия из базидиоспор

Посев базидиоспор производили и непосредственно из плодовых тел грибов по методу Н. Фриза. Для этого плодовые тела собирали в день опыта или за день до него и тогда они хранились в холодильнике при температуре 4—8°С. Шляпку гриба с помощью вазелина прикрепляли под крышку пустой стерильной чашки Петри. Агаровую среду разливали в другие чашки, крышки которых поочередно на 5 мин заменяли крышкой с плодовым телом. За это время в чашку успевают попасть от нескольких сотен до нескольких тысяч базидиоспор. Если плодовые тела малы, то их брали по несколько штук. В этом случае для получения однородного спорового материала брали плодовые тела, произрастающие в одном месте. Для проращивания спор использовали водный агар, сусло-агар, кислую желатину, синтетические среды с тиамином, с добавлением экстрактов плодовых тел грибов, дрожжевого автолизата и др.

В условиях экспедиции выделение некоторых видов с мелкими плодовыми телами проводили следующим образом. Шляпку или ее часть стерильно прикалывали булавкой к ватной пробке пробирки так, чтобы пластинки были обращены вниз, к поверхности агара, но не соприкасались с ним.

Пробирку, закрытую пробкой, с прикрепленной к ней шляпкой гриба оставляли на несколько часов в вертикальном положении, чтобы споры упали на поверхность агара. Затем шляпку стерильно убирали и пробирку со спорами закрывали этой же пробкой, предварительно прожженной над пламенем горелки. Чтобы избежать бактериального загрязнения, в питательную среду так же, как при выделении культур из плодовых тел, добавляли антибиотики.

Температура, оптимальная для прорастания базидиоспор, может значительно варьировать у разных видов и разных штаммов в пределах вида и может изменяться в зависимости от состава питательной среды. Обычно проращивание базидиоспор проводили в пределах от 15 до 30 °С. Для прорастания базидиоспор поддерживалась относительная влажность воздуха не ниже 80 % Для сохранения высокой влажности в чашках Петри последние помещали в эксикатор или заклеивали лейкопластырем, изоляционной лентой, ставили сосуд с водой в термостат.

Получение споровых отпечатков. Для получения споровых отпечатков собирали неповрежденные, зрелые, но с нераскрытым покрывалом плодовые тела, срезая их у поверхности земли. Отобранные плодовые тела очищали кисточкой, а затем быстро обтирали ватой, смоченной 70 %-ным раствором этилового спирта. Основание ножки обрезали, оставляя 0,5—1 см, плодовое тело укрепляли на подставках или держателях и помещали на дно стерильной чашки Петри, покрывая его стерильным стеклянным колпаком. Можно обойтись и без последнего, используя только чашки Петри. Для этого ножку срезают почти до шляпки, шляпку кладут на дно чашки и слегка накрывают крышкой, предварительно обложив края чашки стерильной ватой, чтобы при прохождении воздуха через большие щели задерживалась пыль. В лаборатории при температуре сухого воздуха 20—25 °С споры высыпаются на второй-третий день. В закрытых чашках Петри в холодильнике их можно хранить несколько месяцев.


Ранние публикации:

 
Главная Изготовление мицелия Получение посевного мицелия из базидиоспор