• Увеличить размер шрифта
  • Размер шрифта по умолчанию
  • Уменьшить размер шрифта
Главная Изготовление мицелия Получение чистых мицелиальных культур

Получение чистых мицелиальных культур

E-mail Печать

Для этого исследовались культуры высших базидиальных грибов, выделенные из плодовых тел или базидиоспор дикорастущих видов и хранящиеся в настоящее время в коллекции живых культур высших съедобных грибов отдела микологии и бриологии Института ботаники им. Н. Г. Холодного АН УССР. Выделение в культуру проводилось нашими специалистами начиная с 1965 г. в окрестностях г. Киева.

А также во время экспедиционных выездов в 1976—1978 гг. в Киевскую, Житомирскую, Ровенскую, Волынскую, Львовскую, Тернопольскую, Хмельницкую, Черниговскую, Сумскую, Черкасскую, Харьковскую, Полтавскую, Донецкую, Ворошиловградскую, Запорожскую, Крымскую области УССР. В 1980 г. проводилось выделение культур съедобных грибов в Алтайском и Приморском краях (РСФСР). В настоящее время коллекция насчитывает 289 штаммов, относящихся к 121 виду грибов из 54 родов, преимущественно известных в литературе как съедобные. Часть культур, имеющихся в коллекции, была получена в порядке обмена из отдела биохимии низших организмов Ботанического института им. В. Л. Комарова АН СССР , отдела типовых культур Института микробиологии АН СССР (г. Москва), Белорусского научно-исследовательского института лесного хозяйства (г. Гомель), Института леса Карельского филиала АН СССР (г. Петрозаводск), отдела экспериментальной микологии Микробиологического института Чехословацкой Академии наук (ЧСАН) (г. Прага), кафедры ботаники Ветеринарного университета (ВНР, г. Будапешт), Лесного института в Эберсвальде (ГДР). Штаммы шампиньона 117 и 273 были получены из лаборатории посевного мицелия совхоза «Заречье» (г. Москва).

Получение чистых мицелиальных культур

Выделение мицелиальных культур высших базидиомицетов проводилось, как правило, из плодовых тел и лишь в отдельных случаях путем проращивания базидиоспор или выделения мицелия из субстрата. Были проанализированы и обобщены разрозненные литературные данные относительно методов выделения в культуру высших базидиомицетов из плодовых тел и базидиоспор, модифицированы и дополнены применительно к нашим объектам. Обобщенные литературные данные и наш опыт по выделению в культуру высших базидиомицетов представлен в ряде публикаций. Плодовые тела съедобных грибов собирали обычно в период их массового появления. Выделение проводили в день сбора или же плодовые тела хранили в течение 1—3 дней в холодильнике в полиэтиленовых мешочках. Для выделения выбирали молодые, крепкие, неинфицированные карпофоры.

Перед выделением плодовое тело осторожно очищали от прилипших растительных остатков, почвы и промывали в проточной и стерильной воде (очень быстро, чтобы не напитались водой), сушили на фильтровальной бумаге. Обсохшее плодовое тело обтирали 96°-ным этиловым спиртом. В своей практике мы отказались от обработки карпофоров такими дезинфицирующими средствами, как формалин, сулема и др. Гигроскопические и более старые, а также очень мелкие плодовые тела очищали от грязи и без промывания водой быстро обтирали смоченной спиртом горящей ватой.

Предварительно обработанное одним из  способов плодовое тело разламывали, и кусочек «ткани» из средины стерильным скальпелем, ланцетом или копьем переносили на питательную среду. Выделение производили из разных частей плодового тела: шляпки, ножки, места перехода шляпки в ножку, гимениального слоя. При выборе участка ткани мы исходили из размеров и строения плодового тела. Выделение лучше производить из самой  толстой  части   плодового тела. Для болетальных грибов 1 особенно успешно культура выделялась из основания ножки. В некоторых случаях вокруг кусочков плодового тела из основания ножки появлялись зачатки плодовых тел, как это  наблюдалось чнами у белого гриба. У грибов с мелкими и тонкими плодовыми "телами культуру выделяли путем посева кусочков из мелко нарезанных ножек или пластинок. Выделение из гимения проводили, когда плодовое тело было молодое и шляпка не развернута или затянута снизу покрывалом, у болетальных грибов — пока трубочки гименофора еще закрыты, при этом отбирали внутренние, стерильные части грибной «ткани». Выделение идет более успешно, если брать крупные кусочки (0,5—1,5 см в диаметре).

Части плодового тела помещали на питательную среду в чашки Петри или чашечки для тканевых культур. В условиях экспедиции тканевую культуру помещали сразу в пробирку. Расход среды при посеве на чашки для тканевых культур (диаметр 5—7 см) незначителен, в каждой такой чашке находится только один кусочек, что важно для предотвращения загрязнения. Кусочки плодового тела помещали сверху на агар или частично погружали в агаризованную среду.

Таким же образом мы производили выделение некоторых дереворазрушающих грибов. Во влажную камеру помещали тщательно отмытые, разрезанные плодовые тела или же кусочки древесины, пронизанные мицелием гриба. Чашки Петри с инокулюмом ставили в термостат при температуре 20—25 °С. В жаркое время года чашки с инокулюмом на 1—2 дня помещали в холодильник при 5—10 °С, а затем переносили в термостат. Чтобы относительная влажность воздуха была не ниже 80 %, в термостат ставили сосуд с водой. Молодой растущий мицелий появляется на кусочках плодовых тел у разных видов в разные сроки: от нескольких дней до 3—4 недель. В последнем случае кусочек плодового тела помещали сразу в пробирку, чтобы предохранить его от высыхания, или же оставляли в чашках Петри, заклеив их лейкопластырем.

Выделение культур производили на твердую среду:

  • сусло-агар,
  • пивное сусло 4—8° по Баллингу,
  • агар 20 г (Semerdzieva, Ceip, 1966);
картофельно-глюкозный агар (КГА):
  • картофель 200 г,
  • глюкоза 10 г,
  • агар 20 г,
  • вода 1 л (Пидопличко, 1953).

Если выделение шло плохо и мицелий не образовывал колонию вокруг инокулированной ткани, в состав среды добавляли дрожжевой автолизат, отвар дубовой коры, листьев различных высших растений (обычно в количестве от 0,1 до 5%), грибной экстракт, пептон (0,2%) и др. Грибной экстракт готовили следующим образом: плодовые тела грибов измельчали, заливали холодной водой так, чтобы вода покрывала плодовые тела, и ставили на холод на сутки. После этого жидкость отфильтровывали и дважды стерилизовали при 50,662 кПа, добавляли к среде в количестве 4—5 %. Если в чашке Петри вместе с колониями базидиальных грибов росли колонии плесневых грибов, дрожжей, бактерий, что обычно легко заметить, то в таких случаях предполагаемые колонии базидиомицетов последовательно пересевали с обязательным последующим микроскопическим контролем и избавлялись от инфекции с помощью обычных методов микробиологической техники. При загрязнении культур грибами из родов Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Tri-choderma проводили пересев на агаровую среду с беномилом или фундазолом (50 мг/л), которые ингибировали рост несовершенных грибов, не оказывая влияния на базидиомицеты. В случае загрязнения мукоральными грибами беномил и фундазол были неэффективны.


Ранние публикации:
Более поздние публикации:

 
Главная Изготовление мицелия Получение чистых мицелиальных культур